**色譜儀色譜柱的使用事項(xiàng)包括色譜柱的平衡、再生和維護(hù)等。

一、色譜柱的平衡：

**液相色譜儀反相色譜柱是保存在乙腈中，新柱應(yīng)先用10～20倍柱體積的甲醇或乙腈沖洗色譜柱，**確保分析樣品所使用的流動(dòng)相與乙腈－水互溶。每天用足夠的時(shí)間以流動(dòng)相平衡色譜柱，會(huì)在處理問題方面獲得**的“補(bǔ)償”，而且色譜柱的壽命會(huì)變得更長。

平衡操作步驟：

1、平衡開始時(shí)，將流速緩慢提高，用流動(dòng)相平衡色譜柱直到獲得穩(wěn)定的基線。緩沖鹽或離子對(duì)試劑流速如果較低，需要較長時(shí)間來平衡。

2、如果使用的流動(dòng)相中含有緩沖鹽，應(yīng)注意用純水“過渡”。即每天分析開始前，必須先用純水沖洗30min以上，再用緩沖鹽流動(dòng)相平衡。分析結(jié)束后，必須先用純水沖洗30min以上，除去緩沖鹽之后，再用甲醇沖洗30min保護(hù)色譜柱。

二、色譜柱的再生：

1、建議用來沖洗色譜柱的溶劑體積：

（1）Ф4×125mm色譜柱：

柱體積為1.6mL，所用溶劑體積為30mL。

（2）Ф4×250mm色譜柱：

柱體積為3.2mL，所用溶劑體積為60mL。

（3）Ф10×250mm色譜柱：

柱體積為20mL，所用溶劑體積為400mL。

2、再生方法：

（1）極性固定相的再生：

正庚烷，乙酸乙酯，丙酮，乙醇，水。

（2）非極性固定相的再生：

水，異丙醇，乙腈，水。

3、注意事項(xiàng)：

（1）在對(duì)用NH2改性的色譜柱進(jìn)行再生時(shí)，由于NH2可能以銨根離子形式存在，因此應(yīng)在水洗后用0.1M的氨水沖洗，然后用水沖洗至堿溶液**流出。

（2）如果用有機(jī)溶劑－水不能**洗去硅膠表面吸附的雜質(zhì)，在水洗后加用0.05M的稀硫酸沖洗非常有效。

三、色譜柱的維護(hù)：

1、使用預(yù)柱、保護(hù)柱和分析柱。硅膠在極性流動(dòng)相和離子性流動(dòng)相中有**的溶解度。

2、大多數(shù)反相色譜柱的pH值穩(wěn)定范圍是2～7.5，盡量不超過該色譜柱的pH值范圍。

3、避免流動(dòng)相組成和極性的劇烈變化。

4、流動(dòng)相使用前必須經(jīng)脫氣和過濾處理。

5、如果使用極性或離子性緩沖溶液作流動(dòng)相，應(yīng)在實(shí)驗(yàn)完畢后沖洗干凈色譜柱，并保存于甲醇或乙腈中。

6、氯化物溶劑對(duì)色譜柱有**腐蝕，柱和連接管內(nèi)不能長時(shí)間存留此類溶劑，以避免腐蝕。

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　　凝膠色譜儀凝膠的特征參數(shù)有排阻極限、滲透極限、吸水率、凝膠粒徑、床體積和空隙體積等。

　　一、排阻極限：

　　指不能進(jìn)入凝膠色譜柱凝膠顆粒孔內(nèi)的***小分子的相對(duì)分子質(zhì)量。

　　二、滲透極限：

　　指能夠**進(jìn)入凝膠色譜柱凝膠顆?？變?nèi)的**分子的相對(duì)分子質(zhì)量。

　　三、吸水率（溶脹率）：

　　吸水率 = [（m溶脹平衡后凝膠－m干凝膠）/ m干凝膠]×**

　　四、凝膠粒徑：

　　軟質(zhì)凝膠粒徑較大，為50～150?m。硬質(zhì)凝膠粒徑較小，為5～50?m。凝膠粒徑越小，理論塔板當(dāng)量高度（HETP）越小，分離效率越高。

　　五、床體積：

　　指1g干凝膠溶脹后所占的體積。

　　六、空隙體積：

　　指凝膠色譜柱凝膠顆粒之間的空隙體積，即死體積V0。

　　空隙體積一般用平均相對(duì)分子質(zhì)量為2000的水溶性藍(lán)葡聚糖測定。