1.適用范圍

適用于島津LC-10AD型液相色譜儀的檢定。

2.職責

檢驗員：嚴格按照檢定規(guī)程進行周期檢定。

QC主管：監(jiān)督檢查檢定規(guī)程執(zhí)行情況。

3.檢定項目和技術要求

3.1.輸液系統(tǒng)

3.1.1.泵流量設定值誤差：Ss＜±2%；流量穩(wěn)定性誤差：＜±2%

3.1.2.定性測量重復性誤差（5次定量管進樣）：RSD≤1.5%

3.1.3.定量測量重復性誤差（5次定量管進樣）：RSD≤1.5%

3.2.紫外檢測器性能

3.2.1.可調波長紫外—可見光檢測器波長示值誤差：＜±2nm；重復性誤差：＜±1nm

3.2.2.基線漂移：≤5×10^-3（AU/h）；基線噪聲：≤5×10^-4(AU)

3.2.3.zui小檢定濃度（靜態(tài)）：4×10^-8g/ml（萘的甲醇溶液）

4.檢定條件

4.1.環(huán)境溫度為10～30℃，8小時內溫度波動不超過±3℃，相對濕度低于65%。

4.2.電源電壓：220±22V，電源頻率：50±0.5Hz。

4.3.檢定設備

4.3.1.秒表：分度值小于0.1s。

4.3.2.分析天平：zui大稱量200g，zui小分度值0.1mg。

4.3.3.容量瓶

4.3.4.微量注射器

4.3.5.標準物質和試劑

5.檢定方法

5.1.泵流量設定值誤差Ss、流量穩(wěn)定性誤差S_R的檢定。

將儀器的輸液系統(tǒng)、進樣器、色譜柱和檢測器聯(lián)接好，以甲醇為液動相，按表1設定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動相排出口用事先清洗稱重過的容量瓶收集流動相，同時用秒表計時，準確地收集10～25分鐘，稱重，按下式計算Ss和S_R。

Ss=（Fm—Fs）/Fs×**

S_R=（Fmax—Fmin）/F×**

式中Ss為流量設定值誤差（%）；

Fm=（W2—W1）ρt·t為流量實測值；

W2：容量瓶+流動相的重量（g）；

W1：容量瓶的重量（g）；

Fs：流量設定值（ml/min）；

ρt：實驗溫度下流動相的密度（g/cm³）；

t：收集流動相的時間（min）；

S_R：流量穩(wěn)定性誤差（%）；

Fmax：同一組測量中流量zui大值（ml/min）；

Fmin：同一組測量中流量zui小值（ml/min）；

F：同一組測量中的算術平均值（ml/min）。

5.2.定性、定量測量重復性的檢定

將儀器聯(lián)接好，使之處于正常工作狀態(tài)，用進樣閥的定量管注入適當?shù)臉藴嗜芤海ㄝ粱蚵?lián)苯）或穩(wěn)定的待分析樣品溶液，記錄保留時間和峰面積，連續(xù)測量5次，按下式計算相對標準偏差RSD。

5.3.紫外檢測器性能5.3.1.可調波長紫外-可見光檢測器波長示值誤差和重復性誤差的檢定將檢測器與記錄儀聯(lián)好，接通電源穩(wěn)定后，先將檢測波長調至235nm，用甲醇用流動相，流速1.0ml/min，用進樣器注入重鉻酸鉀的硫酸溶液（取120℃干燥至恒重的基準重鉻酸鉀約60mg，精密稱定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀釋至1000ml，搖勻，即得）20ul，待出峰時立即停泵，改用波長掃描方式，得到重鉻酸鉀在紫外-可見光區(qū)的吸收曲線，記錄其在235nm、257nm、313nm、350nm附近波長處的zui大或zui小吸收波長，分別找出各點zui大或zui小波長與標準波長之差即為波長示值誤差；重復測定3次，各點zui小與zui大值之差即為波長重復性誤差。5.3.2.基線漂移和基線噪聲的檢定將儀器各部分聯(lián)接好，紫外檢測器波長調到254nm，流動相為**甲醇，流速為1.0ml/min，吸收度范圍選擇zui靈敏檔，開機，待基線穩(wěn)定后，記錄基線30-40分鐘，計算基線漂移和噪聲。5.3.3.zui小檢測濃度在靜態(tài)條件下，用進樣器注入4×10^-8g/ml萘的甲醇溶液，樣品峰高應大于或等于兩倍基

線噪聲峰高，按下式計算zui小檢測濃度。

C_l=2×H_N×C /H

式中，C_l：zui小檢測濃度（g/ml）；

H_N：噪聲峰高（記錄儀器數(shù)或實測高度cm）；

C：樣品濃度（g/ml）；

H：樣品峰高（記錄儀器數(shù)或實測高度cm）。

6.檢定結果處理和檢定周期

6.1.檢定結果**項目均符合技術要求者，判為合格，方可使用。若個別部件、某一指標達不到要求，確難以維修而又不影響定性、定量結果準確性者，可作為準用品。

6.2.液相色譜儀的檢定周期為兩年，若更換部件或對儀器性能有懷疑時，應隨時檢定，并記錄檢定結果。

**液相色譜儀的工作過程：

儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內，由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)，在兩相中做相對運動時，經過反復多次的吸附- 解吸的分配過程，各組分在移動速度上產生較大的差別，被分離成單個組分依次從柱內流出，通過檢測器時，樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來。以下是總結**液相色譜儀的的應用：

1、在食品分析中的應用

食品營養(yǎng)成分分析：蛋白質、氨基酸、糖類、色素、維生素、香料、有機酸（鄰苯二甲酸、檸檬酸、蘋果酸等）、有機胺、礦物質等；

食品添加劑分析：甜味劑、防腐劑、著色劑（合成色素如檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、亮藍等）、抗氧化劑等；

食品污染物分析：霉菌毒素（黃曲霉毒素、黃桿菌毒素、大腸桿菌毒素等）、微量元素、多環(huán)芳烴等。

2、在環(huán)境分析中的應用

多環(huán)芳烴（特別是稠環(huán)芳烴）、農藥（如氨基甲酸脂類，反相色譜）殘留等。

3、在生命科學中的應用

HPLC技術目前已成為生物化學家和醫(yī)學家在分子水平上研究生命科學、遺傳工程、臨床化學、分子生物學等必不可少的工具。其在生化領域的應用主要集中于兩個方面：

低分子量物質，如氨基酸、有機酸、有機胺、類固醇、卟啉、糖類、維生素等的分離和測定。

高分子量物質，如多肽、核糖核酸、蛋白質和酶（各種胰島素、**、細胞色素、干擾素等）的純化、分離和測定。

4、在醫(yī)學檢驗中的應用

體液中代謝物測定；藥代動力學研究；臨床**監(jiān)測：

合成**：***、抗憂郁**（冬眠靈、氯丙咪嗪、安定、利眠寧、苯巴比妥等）、黃胺類藥等。

天然**生物堿（吲哚堿、顛茄堿、鴉片堿、**甙）等