【*** 使用手冊(cè)】制備型液相色譜儀目的是對(duì)產(chǎn)品的單體進(jìn)行提取和純化，與蒸餾、萃取等純化方法相比制備型液相色譜法更有效，但對(duì)操作的要求也更高。為保證制備型液相色譜儀可以達(dá)到理想的實(shí)驗(yàn)效果，需要謹(jǐn)慎選擇操作條件，減少影響分離效果的因素?！　∩V柱的選擇　　色譜柱的容量有**限制，每種色譜柱都有自己的負(fù)載能力，因此樣品的導(dǎo)入值上限需要根據(jù)所用的色譜柱確定。色譜柱與大樣品量的關(guān)系如下：　　1.色譜柱內(nèi)半徑越大，柱子的負(fù)載能力越高?！　?.分配系數(shù)K增加，柱子的負(fù)載能力也會(huì)增加。同時(shí)，溶質(zhì)的保留體積同樣也會(huì)增加。　　3.色譜柱的填充方法影響著填充密度，用良好方法填充的柱子密度趨近它的大值，柱子的樣品量和分辨率同樣也會(huì)趨近大值?！　?.采用表面積大的吸附劑雖然會(huì)減弱色譜系統(tǒng)的速度和適用范圍，但可以增加柱子的負(fù)載能力?！　?.柱子的負(fù)載能力還隨著柱子的長度增加而增長，但柱子過長會(huì)損失柱效?！　?.填料顆粒的大小與柱子負(fù)載量也呈正相關(guān)關(guān)系?！　悠返娜芙狻　悠吩谌軇├锏娜芙舛葧?huì)影響注入的大樣品量。在流動(dòng)相里難溶解的物質(zhì)通常不能充分分離或分辨率比較低，因此需要先將樣品溶解在另一種溶劑中，再將這種溶液送人色譜分離系統(tǒng)。中間溶劑的選擇很重要，并且需要經(jīng)驗(yàn)?！　×鲃?dòng)相的純度　　流動(dòng)相的純度與樣品中的純度息息相關(guān)。在分離組分特性相近或痕量組分時(shí)，流動(dòng)相里的雜質(zhì)還可能污染色譜柱，影響分離效能。因此流動(dòng)相須保證純凈?！　×鲃?dòng)相的流速　　流動(dòng)相的流速與分離速度、分離效率相關(guān)，流速越快分離速度越快，但分離效率越低，因此需要選擇合適的速度保證速度與效率并重?！　」潭ㄏ嗟倪x擇　　為了分辨效果，應(yīng)盡量選擇吸附色譜。從填料的容量看，全多孔型比表面多空型好；從固定相微粒的大小看，30~50μ較常用。 液相色譜儀5種常見故障及處理方法

　　液相色譜儀是一種常用的分析儀器，主要由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測(cè)器、信號(hào)記錄系統(tǒng)等部分組成，被廣泛用于生物醫(yī)學(xué)、環(huán)境化學(xué)、石油化工等領(lǐng)域中。

　　1、柱壓高原因

　　(1)緩沖液鹽分如(乙酸銨等)沉積于柱內(nèi);

　　(2)樣品污染沉積。處理對(duì)于**種情況先用40～50℃的純水，低速正向沖洗柱子，待柱壓逐漸下降后，相應(yīng)提高流速?zèng)_洗，柱壓大幅度下降后，用常溫純水沖洗，之后用純甲醇沖洗柱子30分鐘;對(duì)于第二種情況，由樣品的沉積引起污染的C18柱，和純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長短由樣品污染的情況而定)，再用換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。

　　2、氣泡溢出

　　流動(dòng)相內(nèi)有氣泡，關(guān)閉泵，打開泄壓閥，打開purg鍵，清洗脫氣，氣泡不斷從過濾器冒出，進(jìn)入流動(dòng)相，無論打開purge鍵幾次，都無法**不斷產(chǎn)生的氣泡。原因過濾器長期沉浸于乙酸銨等緩沖液內(nèi)，過濾器內(nèi)部由于霉菌的生長繁殖，形成菌團(tuán)，阻塞了過濾器，緩沖液難以流暢地通過過濾器，空氣在泵的壓力作用下經(jīng)過濾器進(jìn)入流動(dòng)相。處理過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，超聲清洗幾分鐘即可;亦可將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中12～36小時(shí)，輕輕震蕩幾次，再將過濾器用純水清洗幾次，打開泄壓閥，打開purge鍵清洗脫氣，如仍有氣泡不斷從過濾器冒出，繼續(xù)將過濾器浸泡于5%硝酸溶液中，如沒有氣泡不斷從過濾器中冒出，說明過濾器內(nèi)部的霉菌菌團(tuán)已被硝酸破壞，流動(dòng)相可以流暢地通過過濾器。打開泄壓閥，打開泵，流速調(diào)至1.0～3.0ml/min，純水沖洗過濾器1小時(shí)左右。即可將過濾器清洗干凈。關(guān)閉泄壓閥，純甲醇沖洗半小時(shí)即可。

　　3、既無壓力指示，又無液體流過

　　(1)泵密封墊圈磨損;

　　(2)大量氣泡進(jìn)入泵體。處理對(duì)于**種情況，更換密封墊圈;對(duì)于第二種情況，在泵作用的同時(shí)，用一個(gè)50ml的玻璃針筒在泵的出口處幫助抽出空氣。

　　4、壓力波動(dòng)大，流量不穩(wěn)定

　　原因系統(tǒng)中有空氣或者單向閥的寶石球和閥座之間夾有異物，使得兩者不能密封。處理工作中注意觀察流動(dòng)相的量，保證不銹鋼濾器沉入儲(chǔ)液器瓶底，避免吸入空氣，流動(dòng)相要充分脫氣。如為單向閥和閥座之間夾有異物，拆下單向閥，放入盛有丙酮的燒杯用超聲波清洗。

　　5、出峰不佳，峰分叉

　　(1)色譜柱被污染;

　　(2)柱頭填料塌陷。處理對(duì)于**種情況，先用純水反向沖洗柱子，然后換成甲醇沖洗，接著用甲醇+異丙醇(4+6)沖洗柱子(沖洗時(shí)間的長短由樣品污染的情況而定)，再換成甲醇沖洗，然后用純水沖洗，***后甲醇沖洗正向沖洗柱子30分鐘以上。如沖洗后依然出峰不佳，則考慮第二種情況。對(duì)于第二種情況，擰開柱頭，檢查柱填料是否硬結(jié)或塌陷。去除硬結(jié)部分(污染的填料)，裝入新填料，滴一滴甲醇，填料下陷，再填，用與柱內(nèi)徑相同的頂端平滑的不銹鋼桿壓緊，再填平，滴甲醇，再壓緊反復(fù)幾次，直至裝滿填平。柱頭用甲醇沖洗干凈，擦凈柱外壁的填料，擰緊柱頭，用純甲醇沖洗30分鐘以上。